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Tinción de Gram: paso a paso y para qué sirve

La tinción de Gram, o simplemente Gram, es una técnica rápida y sencilla que tiene como objetivo diferenciar las bacterias según las características de su pared celular tras la exposición a diferentes colorantes y soluciones.

Así, a través de la tinción de Gram, es posible verificar, además de la forma de las bacterias, el color que adquieren, lo que es un resultado importante para definir otras estrategias de identificación de las especies bacterianas y para que el médico indique un tratamiento preventivo según a las características observadas microscópicamente.

La tinción de Gram generalmente se realiza de forma rutinaria en el laboratorio y es parte del examen de bacterioscopia. Entender qué es la bacterioscopia y cómo se hace.

¿Cómo se hace la tinción de Gram?

La tinción de Gram es un método rápido, práctico y económico para identificar las bacterias responsables de infecciones, siendo útil para que los médicos indiquen un tratamiento preventivo de la infección que se pueda estar presentando, ya que se conocen las características específicas de estos grupos de bacterias,

La tinción de Gram se realiza en 7 pasos principales, sin embargo, el protocolo puede variar según el laboratorio:

  1. Coloque algunas colonias de bacterias en el portaobjetos, agregando una gota de agua para facilitar la homogeneización de las colonias;
  2. Dejar secar un poco, la cuchilla puede pasar rápidamente por la llama para favorecer el secado, sin embargo es importante prestar atención a la temperatura, ya que si la temperatura es muy alta es posible que haya un cambio en la estructura de la bacteria , que puede interferir con el resultado del examen;
  3. Cuando el portaobjetos esté seco, cúbralo con el colorante cristal violeta y déjelo actuar durante aproximadamente 1 minuto;
  4. Lave el portaobjetos con un chorro de agua corriente y cubra el portaobjetos con lugol, que está destinado a fijar el colorante azul, y déjelo actuar durante 1 minuto. Ambos tipos de bacterias pueden absorber el complejo formado por el colorante y el lugol, volviéndose azul;
  5. Luego, lave el portaobjetos con agua corriente y aplique alcohol al 95%, dejándolo actuar durante 30 segundos. El alcohol es el encargado de disolver la membrana lipídica que forman las bacterias gramnegativas y, de esta forma, eliminar el complejo formado entre el colorante y el lugol, decolorando estas bacterias. Sin embargo, en el caso de las bacterias grampositivas, el alcohol deshidrata la pared celular de las bacterias grampositivas, provocando la contracción de los poros y haciéndolos impermeables;
  6. Posteriormente, lavar de nuevo con agua corriente y cubrir el portaobjetos con el segundo colorante, fucsina o safranina, y dejar actuar durante 30 segundos;
  7. Luego, lave el portaobjetos con agua corriente y déjelo secar a temperatura ambiente.
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Una vez seco el portaobjetos, es posible colocar una gota de aceite de inmersión y observar el portaobjetos al microscopio con objetivo 100x, siendo posible verificar la presencia o ausencia de bacterias, así como la presencia de levaduras y células epiteliales.

Para que sirve

La tinción de Gram tiene como objetivo diferenciar las bacterias según las características de la pared celular y la morfología general. Así, según las características observadas al microscopio, las bacterias se pueden clasificar en:

  • bacterias grampositivasque se visualizan con un color azul debido a que no se decoloran con el alcohol, ya que tienen una pared celular más gruesa y sus poros se contraen cuando se exponen al lugol;
  • Bacterias Gram-negativoque se visualizan de color rosa/morado debido a que fueron decolorados por el alcohol y teñidos por safranina o fucsina.

Después de ver las bacterias bajo el microscopio, es posible que se realicen otras pruebas en el laboratorio para identificar las especies de bacterias. Sin embargo, a través de la Gram y asociación con los signos y síntomas que presenta la persona, el médico puede indicar un tratamiento preventivo hasta que se cuente con los resultados de exámenes más específicos, ya que de esta manera es posible disminuir la tasa de replicación bacteriana y prevenir complicaciones.

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